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CCRF-CEM 人急性淋巴細胞白血病細胞介紹
G.E. Foley 等人建立了類淋巴母細胞細胞株CCRF-CEM。細胞是1964年11月從一位四歲白人女性急性淋巴細胞白血病患者的外周血白血球衣中得到。
細胞特性
1) 來源:白血病, 急性淋巴細胞白血病, 外周血, T淋巴母細胞
2) 形態:淋巴母細胞,懸浮生長
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式
(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;
(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
(3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
細胞用途:僅供科研使用。
CCRF-CEM 人急性淋巴細胞白血病細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。
5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。
6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后di一次傳代建議1:2傳代 。
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640(推薦iCell-0002)培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養,補加培養基至6ml。
換液可以通過添加新鮮培養基來維持,每2 - 3天加入新鮮培養基(按體積增加20%至30%);另一種方法是,可以通過離心,然后在2到3×105的活細胞/mL中進行再懸浮。維持細胞密度在2至3×105和1到2×106的活細胞/毫升之間。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%,即可進行傳代培養。
1. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1,細胞凍存時,取上清,可使用血球計數板計數。
2,4min ,1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司主要產品和技術服務:
一、原代細胞服務
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源;
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源;
原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等;
原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務;
二、細胞株/系服務
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書;
細胞系培養過程的技術指導;
細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等;
三、iPS細胞
iPS細胞基礎培養(有滋養層or無滋養層在);
iPS細胞增殖及冷凍保存;
iPS基礎培養技術實習;
新藥及實驗儀器上市前評估;
四、技術外包服務:各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等
五、其他:根據客戶需要定制服務等
序號 | 產品名稱 | 貨號 | 規格 | 售價 | 備注 |
1 | 培養基1640 | icell-0002 | 500ml | 140 |
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2 | 培養基DMEM | icell-0001 | 500ml | 140 |
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3 | 培養基DMEM/F12 | icell-0005 | 500ml | 140 |
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4 | 內皮細胞培養基ECMsciencel | icell-0016 | 500ml | 2280 |
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5 | 動物上皮細胞培養基Epicm-a | icell-0015 | 500ml | 1980 |
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6 | 上皮細胞培養基Epicm | icell-0017 | 500ml | 1980 |
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7 | Mccoy’s 5A 培養基 | icell-0011 | 500ml | 160 |
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8 | MEM培養基 | icell-0012 | 500ml | 140 |
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9 | FBS北美胎牛血清 | GIBCO 16000-044 | 500ml | 6800 |
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10 | FBS墨西哥胎牛血清 | 10437-028 | 500ml | 5616 |
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11 | 馬血清 | gibco.16050122 | 500ml | 1489 |
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12 | DMSO | sigma-D2650 | 100ml | 1520 |
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13 | PBS片劑(1000ml) | 09-9400-100 | 100片 | 4170 |
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14 | PS雙抗(進口) | 15140-122 | 100ml | 452 |
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15 | yi蛋白酶 | 25200-072 | 500ml | 665 |
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