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人胚腎細胞293T是一種廣泛應用于分子生物學、基因工程和病毒學等領域的細胞系。它來源于人類胚胎中的腎小管上皮細胞。
人胚腎細胞293T細胞培養的優點如下:
1、研究對象為活細胞
在實驗中,可以根據需要保持細胞活力,并且可以長期監測、檢測甚至定量評估一些活細胞的狀況,包括活細胞的形狀、結構和生命活動。
2、研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學條件可根據實際需要人為控制。同時,可以應用化學、物理和生物因素作為實驗觀察的條件。這些因素也可以受到嚴格控制。
3、研究樣本能達到比較均一
經過一定代數的細胞培養,得到的細胞系可以達到均一,屬于同一類型的細胞。如有必要,可采用克隆等方法對細胞進行純化。
4、研究內容易于觀察、檢測和記錄
使用了各種研究技術,如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共聚焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等儀器設備。
人胚腎細胞293T培養操作流程:
1、培養基的制備及培養凍存條件:
1)準備RPMI-1640培養基(rpmi-1640:gibco,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清為10%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養箱濕度70%~80%。
3)冷凍保存液:90%血清,10%DMSO,現用現用,液氮保存。
2、細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1ml細胞懸液的凍存管放入37℃水浴中(水面應低于凍存管蓋),搖勻解凍,轉移至15ml離心管中,加入4ml培養基提前準備好,攪拌均勻。1000rpm離心4分鐘,棄上清,加入1ml培養基并吹勻。然后將所有細胞懸液轉移到含有5ml培養基的培養瓶中過夜培養。第二天,更換液體并檢查細胞密度。
2)人胚腎細胞293T細胞培養:細胞密度達到80%-90%即可培養。
具有以下特點:
1、高轉染率:由于其雙倍體狀態,在轉染時比單倍體細胞更容易接受外源DNA并表達。
2、適合制備重組腺病毒和慢病毒載體:可以高效地產生包含重組基因的腺病毒或慢病毒,使其成為常用的基因傳遞工具之一。
3、廣泛應用于原代細胞文化:由于其穩定性和不受質粘附影響而被廣泛用作原代細胞文化系統的對照,如神經元、心肌等。
4、容易獲取且無法再生:相較其他已知的能夠支持多次分裂生長的癌變標準株(如HeLa),293T不能連續無限度地進行傳代,所以不存在惡性增殖的風險。